HuProt? 20K人類蛋白質組芯片

        HuProt? 20K人類蛋白質組芯片，是迄今國際最高通量的蛋白質芯片，芯片上有19,394 種人類全長蛋白質，覆蓋70%的人類基因組ORF區。重組蛋白采用酵母表達系統，逐個進行表達與純化鑒定。在芯片上每個蛋白質均設置技術重復，并設有多種質控點，確保實驗體系穩定可靠。

芯片規格

　　芯片標準：1×25×76mm硅片片基，蛋白點徑~60 μm，體積0.5~1 nL；技術重復：每個蛋白點2次技術重復；熒光檢測：可使用單一或多色標簽；純化體系：所有蛋白質在非變性條件下，通過真核酵母表達體系表達純化；生產條件：溫度4-8℃，濕度30~40%點樣，4℃過夜固定，-80℃長期保存。

蛋白類別

      HuProt? 20K人類蛋白質組芯片通過化學修飾共價結合19275種人類蛋白質和119種小鼠蛋白質。這些蛋白廣泛覆蓋受體、轉錄因子、激酶、胞外基質蛋白、細胞骨架蛋白等30余種蛋白類型，可用于多種生物學功能的創新研究。

應用方向

      HuProt? 20K人類蛋白質組芯片適用于以蛋白質相互作用為基礎原理的各種研究領域，具備廣泛的應用價值。在蛋白與蛋白相互作用篩選、蛋白與核酸相互作用鑒定方面相比傳統的co-IP聯合質譜鑒定的技術路線，更加高效和準確。在小分子藥靶鑒定、單克隆抗體特異性篩選、脂類結合蛋白篩選、酶作用底物鑒定及自身抗體類biomarker的篩選等應用中，其技術優勢不可替代。

檢測原理介紹

　　蛋白質在體內基本全部以蛋白復合狀態發揮功能，對蛋白復合物成員的識別和研究是認識和理解蛋白功能的關鍵。高通量HuProt? 20K蛋白質組芯片是蛋白（抗體）互作譜鑒定的最有力工具，通過釣餌蛋白與芯片上包被的~2萬種背景信息清晰的蛋白質進行互作反應，能夠極大提高相互作用蛋白的篩選范圍和工作效率。

HuProt? 20K與免疫共沉淀（Co-IP）比較的優勢

● 無需進行克隆構建、細胞培養和轉染等實驗；

● 無需進行免疫沉淀實驗，不受靶蛋白表達量和共沉淀效率影響；

● 直接判定互作蛋白，無需進行質譜（MS）鑒定；

● 更加直觀、可靠和快速，有效提高工作效率；

● 待測蛋白無特異性抗體仍然可以進行檢測；

● 待測蛋白有無純化標簽（Tag）都可以檢測；

● 體外實驗，覆蓋范圍更廣泛，可鑒定更多互作蛋白類型和靶點。

應用案例

     HCV復制機制研究--識別宿主細胞中國HCV核心蛋白的結合蛋白（J Virol. 2013, 87(10):5718. ） 詳細內容點擊查看

2.DNA/RNA結合蛋白篩選

HuProt? 20K 篩選核酸結合蛋白的技術優勢

● 無需克隆構建、細胞培養和轉染實驗；

● 無需細胞核蛋白的提取，不受蛋白表達水平影響；

● 無需進行免疫沉淀實驗，不受共沉淀效率影響；

● 與EMSA、ChIP、RIP比較，更適合篩選需求；

● 直接確定結合蛋白，無需進行質譜鑒定；

● 快速可靠，各蛋白信息清晰，驗證實驗簡便；

● 體外實驗，覆蓋范圍更廣泛，可鑒定更多互作蛋白類型和靶點。

應用案例

lncRNA調控機理研究--Gomafu結合蛋白的識別（Mol Psychiatr. 2013; 45(30): 1-9）詳細內容點擊查看

　    腫瘤、炎癥、自身免疫性疾病（如：紅斑狼瘡、類風關、克隆氏病、多發性硬化）等多種疾病中，體內產生和累積大量的自身抗體。HuProt? 20K蛋白質組芯片覆蓋~20000種人類蛋白質，能夠結合并大規模篩選這些人類自身抗體，從而為多種疾病的診斷、預后、藥效評價等提供豐富候選標志物。

● 芯片覆蓋近2萬種人類蛋白質，通量高，獲得biomarker可能性大；

● 較質譜技術更適用于血清/血漿蛋白篩選；

● 特別適合自身免疫病及自身抗體類疾病標志物的篩選；

● 可追溯組織中自身抗體對應抗原的異常，理解發病機理；

● 可訂制小芯片，用于擴大樣本驗證實驗；

● 研究成果的轉化應用和開發有極強便利性。

應用案例

　　人類蛋白質組芯片技術應用于移植排斥標志物篩選（Clin J Am Soc Nephro.2012;23:750–763） 詳細內容點擊查看

      HuProt? 20K蛋白質組芯片包含的~2萬種真核生物酵母表達的人類全長蛋白質，這些蛋白具備充分的生物活性， 可以為多種蛋白修飾 （如磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化、SUMO化、NEDD化及亞硝基化等） 及酶促反應提供大量的候選底物，且每種蛋白生物信息背景清晰。以泛素化檢測為例，如下圖所示：

HuProt? 20K 用于酶底物譜鑒定的技術優勢

● 芯片覆蓋近2萬種人類蛋白質，通量高，底物鑒定范圍全面；

● 可進行多種修飾酶底物譜鑒定，應用范圍廣；

● 驗證效率高，實驗結果準確、全面、創新性強；

● 底物背景信息清晰，方便進行生物信息分析和深入機理解。

應用案例

人類蛋白質組芯片技術應用于FAK激酶新底物識別（Int J Biol Sci.2015;11(4):404-410）  詳細內容點擊查看

5.小分子&單抗藥物靶點篩選

　　化學小分子和單克隆抗體是目前最主要的靶向藥物來源，然而經典的藥物研發體系往往需要15-20年的時間才能開發出適用于臨床的靶向藥物，且研發失敗率非常高。      HuProt? 20K 蛋白質組芯片是迄今為止最為簡便、快速和準確的藥物靶點篩選實驗技術，該芯片可以快速地定性和相對定量地分析經過熒光、生物素、放射性同位素標記的小分子或單克隆抗體藥物與~2萬種人類全長蛋白質的結合情況，判斷候選分子的結合靶點和特異性，為藥物研發體系的改進提供強大的技術保障。

A.檢驗HuProt? 20K 芯片質量：綠色熒光點（anti-GST），紅色熒光點（Positive Control），白色方框（ZEB2蛋白）；

B.競爭藥廠的ZEB2單抗特異性檢測結果：白色方框（ZEB2蛋白），白色箭頭（抗體結合非特異蛋白）；

C.本藥廠的ZEB2單抗特異性檢測結果：白色方框（ZEB2蛋白）。

結論：本藥廠的ZEB2單抗靶點單一，較競爭藥廠的單抗藥物特異性更強，具有更優的應用價值。

應用案例

人類蛋白質組芯片技術應用于單克隆抗體識別研究（Mol Cell Proteomics, 2012, 11(6)） 詳細內容點擊查看

最新代表文獻

蛋白質相互作用譜篩選

1.Jung J G, et al. Notch3 Interactome Analysis Identified WWP2 as a Negative Regulator of Notch3 Signaling in Ovarian Cancer. PLoS genet, 2014, 10(10): e1004751.

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4.Ma TM, et al. Serine Racemase Regulated by Binding to Stargazin and PSD-95. J Biol Chem. 2014(289): 29631-29641.

5.Chen Y, et al., Bcl2-associated athanogene 3 interactome analysis reveals a new role in modulating proteasome activity. Mol Cell Proteomics. 2013; 12(10): 2804-19.

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DNA/RNA結合蛋白篩選

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4.Donnelly C J, et al. RNA toxicity from the ALS/FTD C9ORF72 expansion is mitigated by antisense intervention.Neuron, 2013, 80(2): 415-428.

自身抗體譜篩選

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蛋白修飾與酶底物譜鑒定

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4. Feijs K L, et al. ARTD10 substrate identification on protein microarrays: regulation of GSK3beta by mono-ADP-ribosylation. Cell Commun Signal, 2013, 11(5).

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小分子&單抗藥物靶點篩選

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2. Jeong J S, et al. Rapid identification of monospecific monoclonal antibodies using a human proteome microarray.Molecular & Cellular Proteomics, 2012, 11(6): O111. 016253.

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