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當(dāng)前位置
lncRNA測(cè)序
長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。利用新一代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行l(wèi)ncRNA測(cè)序,并結(jié)合生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)工具進(jìn)行l(wèi)ncRNA分析,有助于科研工作者更快發(fā)現(xiàn)那些具有重要調(diào)控功能的lncRNA,分析其與特定生物學(xué)過程的關(guān)系。該方法可以更加有效地獲取lncRNA序列以及位置信息,且突破了常規(guī)lncRNA芯片檢測(cè)技術(shù)的使用范圍限制,還可對(duì)新的lncRNA進(jìn)行預(yù)測(cè)及功能分析,極大促進(jìn)lncRNA的深入研究。 技術(shù)穩(wěn)定,建庫(kù)重復(fù)性好 同一樣本重復(fù)建庫(kù)相關(guān)性Pearson值大于0.993 高特異性 使用特定方法降低樣本中rRNA的豐度 高準(zhǔn)確度 構(gòu)建鏈特異性轉(zhuǎn)錄組文庫(kù),快速、有效、準(zhǔn)確地獲取樣本中幾乎全部的lncRNA序列及其位置信息 分析嚴(yán)格 系統(tǒng)鑒定已知lncRNA,設(shè)置嚴(yán)格的篩選條件用于發(fā)現(xiàn)新的lncRNA 特色lncRNA高級(jí)分析 lncRNA cis和trans調(diào)控機(jī)制以及ceRNA調(diào)控機(jī)制等 經(jīng)驗(yàn)豐富 已對(duì)多種動(dòng)植物的lncRNA進(jìn)行測(cè)序分析 案例展示 案例一 梗阻性黃疸大鼠模型胸段脊髓的 lncRNA 表達(dá)特征分析 研究背景脊髓中包含復(fù)雜的功能基因和長(zhǎng)鏈非編碼 RNA,深刻地影響病理性疾病的發(fā)生和發(fā)展。盡管阻塞性黃疸在多種臨床疾病中已有報(bào)道,但胸段脊髓中 lncRNA 表達(dá)模式仍有待于探究。 研究?jī)?nèi)容 我們攜手河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院,共同探究阻塞性黃疸模型胸段脊髓的 mRNA 和 lncRNA 的表達(dá)模式,其中 mRNA和 lncRNA 的測(cè)序和分析工作由我們完成。該文章利用 lncRNA 測(cè)序探究胸段脊髓中 lncRNA 表達(dá)特征,通過 GO 和 KEGG 富集分析對(duì)基因功能進(jìn)行注釋,研究了隨著時(shí)間變化,阻塞性黃疸模型胸段脊髓的 mRNA 和 lncRNA 表達(dá)模式特征。
1. 構(gòu)建大鼠阻塞性黃疸模型,發(fā)現(xiàn) BDL 組大鼠的耳朵呈現(xiàn)黃色、血清總膽紅素水平升高。 2. 對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行脊髓 lncRNA 測(cè)序,通過散點(diǎn)圖和熱圖對(duì)結(jié)果進(jìn)行特征分析,共篩選獲得 2800 個(gè)差異 mRNAs 以及 2033 個(gè)差異 lncRNAs,并對(duì)差異表達(dá)的 mRNA 進(jìn)行 GO 和 KEGG 功能注釋。 3. qRT-PCR 驗(yàn)證差異基因的表達(dá),挑選 5 個(gè)上調(diào) lncRNA 和 5 個(gè)下調(diào) lncRNA 進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果發(fā)現(xiàn) NONRATT002335 和 NONRATT018085 的表達(dá)量顯著上調(diào),NONRATT025415、NONRATT025388 以及 NONRATT025409 的表達(dá)量顯著下調(diào)。 4. 對(duì)模型組 14 天和 18 天的 lncRNA 表達(dá)進(jìn)行差異分析發(fā)現(xiàn),NONRATT002335 和 NONRATT018085 的表達(dá)量顯著上調(diào),NONRATT025415、NONRATT025388 和 NONRATT025409 的表達(dá)量顯著下調(diào)。 參考文獻(xiàn) Wang Q, Li ZX, Liu BW, et al. Altered expression of differential gene and lncRNA in the lower thoracic spinal cord on different time courses of experimental obstructive jaundice model accompanied with altered peripheral nociception in rats. Oncotarget 2017; 8(62): 106098-106112. (IF: 5.168) 常見問題 1. lncRNA 測(cè)序建庫(kù)與常規(guī)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的區(qū)別是什么?長(zhǎng)鏈非編碼 RNA 建庫(kù)主要通過去除 rRNA,構(gòu)建鏈特異性文庫(kù)。不同于常規(guī)轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目基于 polyA 富集,是因?yàn)橛醒芯堪l(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)一部分(>24%)的長(zhǎng)鏈非編碼 RNA 都是缺少 polyA 尾的。鏈特異建庫(kù)有助于我們確定轉(zhuǎn)錄的方向,并使得反義轉(zhuǎn)錄本的定量更為準(zhǔn)確。而常規(guī)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序一般不要求構(gòu)建鏈特異性文庫(kù)。 2. lncRNA 測(cè)序獲得的差異 lncRNA 如何進(jìn)行篩選? 首先可以根據(jù) fold change 值和 p value 對(duì)差異 lncRNA 進(jìn)行篩選,然后通過 lncRNA 和 mRNA 共表達(dá)分析,從關(guān)鍵基因或關(guān)鍵信號(hào)通路層面入手去鎖定目標(biāo) lncRNA,另外可以通過lncRNA高級(jí)分析從 lncRNA 的 cis 和 trans 調(diào)控機(jī)制層面入手,鎖定目標(biāo) lncRNA。 |