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當(dāng)前位置
樣本準(zhǔn)備
1.血液樣本 1.1 全血采集要求: 全血中的DNA,以EDTA采血管為例,需要在采血后顛倒混勻8次,使血液與抗凝劑充分混合。 1.1.1 全血重量或體積 采血量要大于1mL,最低500ul 1.1.2 全血注意事項(xiàng) 采用EDTA抗凝管采血,禁用肝素抗凝管。 1.1.3 運(yùn)輸條件 A.直接使用抗凝采血管寄送即可; B.如果短期保存,可放入-20℃或-80℃冰箱保存,如果長(zhǎng)期保存,可放入液氮中,采用低溫運(yùn)輸。的方式進(jìn)行送樣。 1.2 游離DNA采集要求: 如果研究的是血漿中的游離DNA,可以采用EDTA采血管、STRECK采血管、ARDENT采血管和ARtech采血管等,不同的采血管保存溫度、時(shí)間和采血體積也是不同的,其中后三種采血管是專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于從血漿中取得高質(zhì)量游離DNA,這種采血管含有獨(dú)特的抗凝和保鮮試劑,可以在防止游離DNA降解的同時(shí)穩(wěn)定白細(xì)胞,以減少血細(xì)胞內(nèi)DNA釋放到血漿從而稀釋目標(biāo)游離DNA。 1.2.1 游離DNA重量或體積 需提供5-10ml 1.2.2 游離DNA注意事項(xiàng)
1.2.3 游離DNA運(yùn)輸條件 A.未富集好的cfDNA需要新鮮血液,常溫運(yùn)輸。夏天高溫天氣可碎冰寄送,并裹上隔熱泡沫防止冷凍結(jié)冰; B.已富集好的cfDNA需要干冰運(yùn)輸。 2.組織 2.1 組織采集要求: 凍存的新鮮組織樣本,迅速取材,離體后立即用0.9%的生理鹽水清洗,液氮速凍,或直接放入-80°冰箱凍存。條件允許可使用商業(yè)核酸儲(chǔ)存液 2.2 重量或體積 0.1g-3ug,或綠豆大小~黃豆粒大小。 2.3 注意事項(xiàng) 自行分離好絕對(duì)目的部位組織,注意組織量多的不能全部取樣,只隨機(jī)選取適量組織提取。 2.4運(yùn)輸條件 液氮速凍,-80度保存,干冰運(yùn)輸。 3.FFPE 3.1 FFFE采集要求 從取下組織到完成包埋所用時(shí)間盡可能短,取樣時(shí)避免混入脂肪組織。 3.2 重量或體積 切片組織細(xì)胞>30000個(gè); 有核細(xì)胞比例>80%; 腫瘤細(xì)胞比例>20%; FFPE樣本面積10mm×10mm; 每張白片或蠟卷厚度5~10um,需6-8片; 若為石蠟塊,厚度需達(dá)40um。 3.3注意事項(xiàng) 盡量采用新鮮組織包埋的石蠟切片或蠟塊。注意避免不同樣本蠟片交叉污染。 3.4 運(yùn)輸條件 常溫或4°運(yùn)輸。 4.唾液 4.1 唾液樣本采集要求 提前30min用飲用水漱口,然后唾液采集前不得吸煙,進(jìn)食,飲水等,進(jìn)量能用舌頭多刮上下顎,同時(shí)可以用牙齒多刮一下舌頭,保證脫落細(xì)胞的數(shù)量。 4.2 重量或體積 >1ml,盡量收集較多的細(xì)胞 4.3注意事項(xiàng) 唾液采集樣本會(huì)因?yàn)橛脩?hù)的操作方式有DNA提取失敗的可能性,所以我們介紹下如何更好的保證您的DNA樣本一次性提取成功。 首先,DNA的提取是通過(guò)唾液里面包含的脫落細(xì)胞,而不是唾液本身。所以在采集唾液樣本的時(shí)候,您要盡可能的用舌頭多刮幾次上下顎,同時(shí)也可以用牙齒稍微的刮一下舌頭,保證脫落細(xì)胞的數(shù)量。 保證您在過(guò)去30分鐘內(nèi)沒(méi)有進(jìn)食,飲水,抽煙等影響采樣成功率的行為,建議早上起床**件事就是采樣,保證采樣成功率。請(qǐng)務(wù)必注意,不要在采樣之前用漱口水漱口,也不建議漱口之后再采樣。 4.4 運(yùn)輸條件 常溫或4°運(yùn)輸。 5.口腔拭子 5.1 口腔拭子樣本采集要求 提前30min用飲用水漱口,然后采集前不得吸煙,進(jìn)食,飲水等,進(jìn)量能用棉簽多刮上下顎,保證脫落細(xì)胞的數(shù)量 5.2 重量或體積 棉簽反復(fù)刮10-20次左右 5.3注意事項(xiàng) 采樣準(zhǔn)備:準(zhǔn)備一杯白開(kāi)水,飲入約30 mL充分洗漱口腔約30秒,吐掉。重復(fù)2-3次。30分鐘后,才能采樣。注意:30分鐘內(nèi),請(qǐng)不要進(jìn)食、飲水、吸煙、飲用含有咖啡因和碳酸的飲品等,因?yàn)樯鲜鲂袆?dòng)會(huì)造成取樣失敗 5.4 運(yùn)輸條件 常溫或4°運(yùn)輸。 6.細(xì)胞 6.1 細(xì)胞樣本采集要求 6.1.1懸浮細(xì)胞:懸浮細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后,離心去除培養(yǎng)液;收集的細(xì)胞用PBS緩沖液快速洗2次,低速離心除去PBS緩沖液,收集細(xì)胞沉淀。 6.1.2 貼壁細(xì)胞:貼壁細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后,吸取去除培養(yǎng)液,胰酶消化,用PBS緩沖液快速洗2次并收集洗下的細(xì)胞;低速離心除去PBS緩沖液,收集細(xì)胞沉淀。 6.1.3 分離細(xì)胞:新鮮組織分離的細(xì)胞。 6.2 重量或體積 2×106個(gè)細(xì)胞/ml以上。 6.3 運(yùn)輸條件 -80°保存,干冰運(yùn)輸。 7.gDNA 7.1gDNA送樣要求 7.1.1相關(guān)的純度要求如下: 1. Protein/RNAfree: 260/280 ratio >1.85; 2. Solventfree: 260/230 ratio >2.0; 7.1.2 樣本濃度要求: 1. 通常樣本濃度10ng/ul以上,總量300-1000ng,做850K芯片要求總量在500-1500n; 2. XT芯片樣本總量在50ng以上均可上機(jī); 3. DNA溶解在ddH2O,低濃度TE buffer或EB buffer中,若保存在乙醇中需要純化后實(shí)驗(yàn)。 7.1.3 樣本電泳質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn): 1. 判A標(biāo)準(zhǔn):DNA主帶清晰,無(wú)色素、蛋白、糖類(lèi)等雜質(zhì)污染,總量滿(mǎn)足一次標(biāo)準(zhǔn)上芯片需求,可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn); 2. 判B標(biāo)準(zhǔn):DNA主帶稍有降解,無(wú)色素、蛋白、糖類(lèi)等雜質(zhì)污染,總量按滿(mǎn)足一次標(biāo)準(zhǔn)芯片實(shí)驗(yàn)需求,可以嘗試進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn); 3. 判C標(biāo)準(zhǔn):DNA主帶降解明顯,無(wú)色素、蛋白、糖類(lèi)等雜質(zhì)污染,總量?jī)H能滿(mǎn)足一次風(fēng)險(xiǎn)上芯片需求,可嘗試進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)上機(jī); 4. 判D標(biāo)準(zhǔn):DNA條帶彌散嚴(yán)重,或有色素、嚴(yán)重蛋白、嚴(yán)重糖類(lèi)等雜質(zhì)污染,或總量和濃度都無(wú)法滿(mǎn)足最低上芯片需求,不建議進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 7.2重量或體積 基因組DNA樣本需要提供20ul以上體積. LCG芯片(ASA,GSA,CGA芯片)總量不小于200ng,大于500ng。 XT芯片樣本總量在不小于50ng,大于500ng。 935K和MSA甲基化芯片總量不小于500ng,大于1000ng。 7.3運(yùn)輸條件 要求干冰運(yùn)輸,短途樣本可4°冰袋運(yùn)輸。單個(gè)樣本管蓋用封口膜封好,96孔板裝樣本用熱封膜封住管口或3M封口膜封,以免漏液。 |