數字PCR儀器：QIAGEN QIAcuity One
技術原理
數字PCR( 也可稱單分子PCR) 一般包括兩部分內容，即PCR 擴增和熒光信號分析。在PCR 擴增階段，與傳統技術不同，數字PCR 一般需要將樣品稀釋到單分子水平，并平均分配到幾十至幾萬個單元中進行反應。不同于qPCR 對每個循環進行實時熒光測定的方法，數字PCR 技術是在擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集。最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量。數字PCR 的定量方法不依賴于擴增曲線的循環閾值，因此不受擴增效率的影響，也不必采用看家基因和標準曲線，具有很好的準確度和重現性，可以實現絕對定量分析。在未來十年內，醫學保健的目標是提供優質高效的個性化醫療。PCR 方法會在實現這個目標的過程中發揮重要作用。相比于傳統的PCR，數字PCR 技術有著無可比擬的優勢和廣泛的應用前景。 
數字PCR檢測原理
數字PCR檢測流程
應用領域
·突變/稀有變異檢測（Mutation/Rare variant detection）
·拷貝數變異（Copy-number variation）
·進入外周循環（包括血液和糞便）的腫瘤組織核酸分析
·無創產前篩查 ·轉化移植檢測 ·藥理學（Pharmacogenetics）
·基因表達分析（Gene expression analysis）-特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品
·線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析
·數字PCR可以驗證二代測序(NGS)
優勢
不依賴Ct值，無需標準曲線，即可實現真正的絕對定量
高精確度、高靈敏度，熒光定量qPCR靈敏度為1%-0.1%，數字化PCR靈敏度可達0.01-0.001%。
對干擾分子（背景信號、PCR抑制劑等）耐受度高，通過信號的“有”“無”定量而不是Ct值。
案例
1、數字PCR研究基因表達
遇到基因豐度非常低的，或者樣本濃度低的，可以選擇數字化PCR，通常CT值大于30的時候，熒光定量qPCR的精確度和重復性會大大降低，這個時候可考慮數字化PCR。
2、外泌體micRNA
外泌體里面的micRNA含量是非常低的，提取外泌體也是個非常費時費錢的事情，千辛萬苦提取出來的樣本，保險起見，用數字化PCR是非常不錯的一個選擇，而且也非常便宜。
3、CNV檢測
4、轉基因含量檢測
5、基因編輯結果驗證
6、SNP基因分型
7、德立替尼治療HR+/HER2-轉移性乳腺癌
8、肺癌T790M突變-cfDNA動態監測
9、白血病融合基因檢測
參考文獻
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